靈芝孢子粉對亞硝酸鈉致果蠅畸變效應的抑製作用研究

環境與健康雜誌
200
9
年
7
月第
2
6
卷第
7
期
J
Environ
Health,
July
200
9
,
Vol． 2
6
,
No．
7
文章編號：
1001-5914
（
200
9
）
07
-
0598
-
03
靈芝孢子粉對亞硝酸鈉致果蠅畸變效應的抑製作用研究
王鑫，
盧路，
葉敬波，
劉志傑，
伍嘉明，
何炎明
摘要：
目的
研究靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的黑腹果蠅畸變效應的抑製作用
。
方法
將野生型雄性黑腹果蠅飢餓
處理
24
h
，
接著轉移到
0
、
0.001
、
0.01
、
0.05
和
0.1
g/L
的亞硝酸鈉培養基里培養
24
h
，
再加入雌果蠅培養
7
d
。
以
0
、
0.2%
、
1%
、
2%
的去壁和未去壁靈芝孢子粉培養經
0
、
0.01
、
0.1
g/L
亞硝酸鈉染毒
24
h
後的果蠅
7
d
，以基本培養基培養的果蠅為
陰性對照
。
統計子代果蠅數和畸變數，
併計算畸變率
。
結果
畸變的果蠅主要以殘翅居多，
還有一些是白體，
極個別的眼睛
發生畸變
。
隨著亞硝酸鈉染毒濃度的增加，
子代果蠅數呈下降趨勢，
畸變率呈上升趨勢
。
隨著未去壁靈芝孢子粉染毒濃度
的增加，
子代果蠅數呈下降趨勢
。
與陰性對照組相比，
0.1
、
0.01
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
的未去壁靈芝孢子粉組子代果蠅畸變率
均較高，差異有統計學意義
（
P
<0.05
或
P
<0.01
）
。
與陰性對照組相比，
0.01
g/L
亞硝酸鈉
+1%
，
2%
的去壁靈芝孢子粉組和
0.1
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
的去壁靈芝孢子粉組子代果蠅數均較多，
差異有統計學意義
（
P
<0.05
或
P
<0.01
）
。
隨著去壁靈芝孢
子粉染毒濃度的增加，
子代果蠅畸變率呈下降趨勢
。
結論
靈芝孢子粉可抑制亞硝酸鈉誘發的果蠅畸變效應
。
關鍵詞：
靈芝孢子；
畸變；
果蠅；
亞硝酸鈉
中圖分類號：
R994.6
文獻標識碼：
A
Antagonistic
Effects
of
Ganoderma
Spore
on
Mutation
Induced
by
Sodium
Nitrite
in
Drosophila
melanogaster
WANG
Xin
，
LU
Lu
，
YE
Jing
-
bo
，
et
al
.
School
of
Life
Sciences
，
Sun
Yat
-
sen
University
，
Guangzhou
，
Guangdong
510275
，
China
Abstract
：
Objective
To
study
the
antagonistic
effects
of
Ganoderma
spore
on
mutation
induced
by
NaNO
2
in
Drosophila
melanogaster
.
Methods
After
24
hours
of
starvation
，
male
Drosophila
melanogaster
were
transferred
to
the
culture
bottles
with
medium
with
NaNO
2
of
0
，
0.001
，
0.01
，
0.05
and
0.1
g/L
for
24
hours
and
then
cultured
with
female
Drosophila
melanogaster
for
7
days.
Male
Drosophila
melanogaster
were
treated
with
NaNO
2
at
the
doses
of
0
，
0.01
，
0.001
g/L
for
24
hours
and
then
transferred
to
the
medium
with
Ganoderma
spores
at
the
dose
of
0.2%
，
1%
，
2%
，
cultured
with
female
Drosophila
melanogaster
for
7
days.
The
distilled
water
was
used
as
the
negative
control.
The
amount
of
F1
generation
and
the
mutation
of
the
F1
generation
were
calculated.
Results
The
mutation
Drosophila
melanogaster
were
mainly
vestigial
，
some
had
malformation
with
white
body
and
strange
eyes.
Compared
with
the
negative
control
group
，
the
count
of
offspring
decreased
，
the
rate
of
mutation
proved
positively
correlated
to
the
concentration
of
NaNO
2
.
High
dose
of
sporoderm
-
unbroken
spores
could
cause
a
decrease
of
number
of
offspring.
Compared
with
the
negative
control
group
，
the
mutation
in
the
group
of
0.1
，
0.01
g/L
NaNO
2
with
0.2%
sporoderm
-
unbroken
spores
was
much
higher
(
P
<0.01
or
P
<0.05).
Compared
with
the
negative
group
，
number
of
offspring
in
the
group
of
0.01
g/L
NaNO
2
with
1%
，
2%
sporoderm
-
broken
and
the
group
of
0.1
g/L
NaNO
2
with
0.2%
sporoderm
-
broken
increased(
P
<0.01
or
P
<0.05).
The
rate
of
mutation
proved
negatively
correlated
to
the
concentration
of
sporoderm
-
broken
spores.
Conclusion
Ganoderma
spore
has
a
significant
antagonistic
effects
on
mutation
induced
by
NaNO
2
in
Drosophila
melanogaster
.
Key
words
：
Ganoderma
spore
；
Mutation
；
Drosophila
melanogaster
；
Sodium
nitrite
基金項目：
中山大學實驗室開放基金資助項目
（
KF200808
）
作者單位：
中山大學生命科學院
（
廣東
廣州
510275
）
作者簡介：
王鑫
（
1987-)
，
男，
本科生，
從事環境和人類健康研究
。
通訊作者：
何炎明，
E
-
mail
：
heym@mail.sysu.edu.cn
靈芝
(
Ganoderma
lucidum
)
是一種珍貴的藥用真菌，
屬於擔子
菌綱
、
多孔菌科
、
靈芝菌亞科
、
靈芝菌屬
[1-3]
。
靈芝在發育後期彈
射釋放出的種子在生物學上稱擔孢子，
集中起來後呈粉末狀，
通
稱靈芝孢子粉，
靈芝孢子粉在增強免疫
、
抑制腫瘤方面的藥效遠
超過其母體靈芝
[4]
。
目前，
有關靈芝孢子粉的解毒和增強生殖能
力的研究很少報導
。
本研究以性狀明顯
、
生活週期短的黑腹果蠅
為實驗材料
[5
，
6]
，
從靈芝孢子粉對亞硝酸鈉致果蠅遺傳及畸變率
的影響出發設計實驗，旨在通過高通量的果蠅遺​​傳統計學數據
來檢驗靈芝孢子粉對亞硝酸鈉致畸變效應的抑製作用，並定性
比較破壁靈芝孢子粉與未破壁靈芝孢子粉抗畸變效果的差異
。
1
材料與方法
1.1
主要試劑
亞硝酸鈉
（
分析純，
天津市化學試劑一廠
）
。
靈芝孢子粉
（
濃
度為
100%
，廣東省微生物研究所廣東粵微食用菌技術有限公
司
）
。
野生型雄性黑腹果蠅
［
中山大學生命科學院遺傳學實驗室
提供，
18
號品系，實驗動物生產許可證號為：
SCXK
（粵
）
2004
-
0011
，
實驗動物使用許可證號為：
SYXK
（
粵
）
2007
-
0081
］
。
1.2
果蠅基本培養基的配製
普通果蠅培養基參照文獻
[7]
略加改良，
向
1
L
水中加入
8
g
瓊脂
、
100
g
麥片
、
90
g
紅糖
、
8
ml
丙酸
、
5
g
酵母粉，分裝於培養
管裡，
每管
50
g
。
染毒培養基是在普通培養基上加入一定濃度的
亞硝酸鈉，靈芝孢子粉解毒組是在普通培養基上加入一定量的
去壁和不去壁靈芝孢子粉
。
1.3
方法
1.3.1
亞硝酸鈉對子代果蠅的致畸變效應實驗
將雄果蠅飢餓
處理
24
h
，
接著轉移到
0
、
0.001
、
0.01
、
0.05
和
0.1
g/L
的亞硝酸鈉
培養基里培養
24
h
，
再加入雌果蠅，
每個培養瓶有
5
對親本，
常
溫下
（
25
℃
）
培養
7
d
。
1.3.2
靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的抑制
作用實驗
把雄果蠅飢餓處理
24
h
，
然後轉移到
0.1
和
0.01
g/L
的亞硝酸鈉染毒培養基中，
染毒
24
h
，
再轉移到
0.2%
，
1%
，
2%
的
【
論著
】
598
·
·

環境與健康雜誌
200
9
年
7
月第
2
6
卷第
7
期
J
Environ
Health,
July
200
9
,
Vol． 2
6
,
No．
7
去壁和未去壁的靈芝孢子粉解毒培養基中，
各
6
管，
並以普通培
養基為陰性對照，
最後放入雌果蠅，
每個培養瓶有
5
對親本，
常
溫下
（
25
℃
）
培養
7
d
。
1.4
檢測指標
統計各管子代果蠅的雄
、
雌數及畸變數，
畸變主要通過觀察
翅膀
、
眼睛和體色等幾個方面進行確定
。
1.5
統計學方法
採用
SPSS
10.0
軟件進行統計學分析
。
計量資料數據以
x±s
進
行
表
示
，
多
組
間
比
較
採
用
單
因
素
方
差
分
析
（
One
Way
ANOVA
）
，
組間兩兩比較採用
SNK
檢驗；
率間比較採用
χ
2
檢驗
。
以
P
<0.05
表示差異有統計學意義
。
2
結果
2.1
亞硝酸鈉對子代果蠅的致畸變效應實驗
亞硝酸鈉對子代果蠅的致畸變效應實驗結果見表
1
。
表
1
可見，與對照組相比，
0.001
、
0.01
、
0.05
和
0.1
g/L
的
亞硝酸鈉染
毒組子代果蠅數均較少，
畸變率均較高，
差異有統計學意義
（
P
<
0.05
或
P
<0.01
）
。
且隨著亞硝酸鈉染毒濃度的增加，
子代果蠅數
呈下降趨勢，
畸變率呈上升趨勢
。
畸變的果蠅主要以殘翅居多，
還有一些是白體，
極個別的眼睛發生畸變
。
2.2
靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的抑製作
用實驗
畸變的果蠅主要以殘翅居多，
還有一些是白體，
極個別的個
體眼睛有畸變
。
2.2.1
未去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應
的抑製作用實驗
未去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果
蠅畸變效應的抑製作用實驗結果見表
2
。
表
2
可見，
與陰性對照
組相比，
0.01
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
，
1%
，
2%
的未去壁靈芝孢子粉
組子代果蠅數均較多，
差異有統計學意義
（
P
<0.05
或
P
<0.01
）
；
而
0.1
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
，
1%
，
2%
的未去壁靈芝孢子粉組子代
果蠅數均較多，
但差異無統計學意義
（
P
>0.05
）
。
且隨著未去壁靈
芝孢子粉染毒濃度的增加，
子代果蠅數呈下降趨勢
。
與陰性對照組相比，
0.1
、
0.01
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
的未去壁
靈芝孢子粉組子代果蠅畸變率均較高，
差異有統計學意義
（
P
<
0.05
或
P
<0.01
）
。
2.2.2
去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的
抑製作用實驗
去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸
變效應的抑製作用實驗結果見表
3
。
表
3
可見，
與陰性對照組相
比，
0.01
g/L
亞硝酸鈉
+1%
，
2%
的去壁靈芝孢子粉組和
0.1
g/L
亞
硝酸鈉
+0.2%
的去壁靈芝孢子粉組子代果蠅數均較多，差異有
統計學意義
（
P
<0.05
或
P
<0.01
）
。
與陰性對照組相比，
0.01
、
0.1
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
的去壁靈
芝孢子粉組子代果蠅畸變率均較高，
差異有統計學意義
（
P
<0.05
或
P
<0.01
）
；
且隨著去壁靈芝孢子粉染毒濃度的增加，
子代果蠅
畸變率呈下降趨勢
。
3
討論
本次研究結果顯示，
亞硝酸鈉對果蠅有很強的致畸變效應，
且致畸變效應隨著亞硝酸鈉濃度的增加而升高；去壁和未去壁
的靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的畸變效應有良好的抑制效應，
並且隨著濃度的增大，
抑制效果更明顯
。
亞硝酸鈉有較強毒性，並且是致​​癌物質，在亞硝酸鈉分子
中，
氮是
+3
價，
既有還原性又有氧化性
。
靈芝作為中醫良藥，
在
於其本身含有的複雜藥用成分
。
有研究表明，
其提取物中除含有
人體所必需的多醣類
、
蛋白質
、
維生素
、
氨基酸外，
還含有甾醇
、
內脂
、
香豆精等；
另外，
靈芝中的礦物質和微量元素極其豐富，
尤
其是鍺元素含量較多
[1]
。
這些物質對細胞的生長和分化
、
細胞之
間的信息交流
、
神經系統的激動性和傳導性都有重要作用
[8]
。
這
可能是靈芝可以起到解毒作用的主要原因之一
。
靈芝孢子粉的活性部位主要在壁內，所以破壁的靈芝孢子
粉應該有比未破壁的靈芝孢子粉更好的藥效
。
但要想獲得全破
壁的靈芝孢子粉而又不破壞裡面的活性物質在工業上有一定難
度，這導致目前市面上破壁靈芝孢子粉的價格要遠遠高於未破
壁的靈芝孢子粉價格
[4]
。
本次研究結果顯示，
畸變的果蠅主要以殘翅居多，
還有一些
是白體，極個別的眼睛發生畸變
。
隨著亞硝酸鈉染毒濃度的增
加，
子代果蠅數呈下降趨勢，
畸變率呈上升趨勢
。
隨著未去壁靈
芝孢子粉染毒濃度的增加，
子代果蠅數呈下降趨勢
。
與陰性對照
組相比，
0.1
、
0.01
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
的未去壁靈芝孢子粉組子
代果蠅畸變率均較高，
差異有統計學意義
（
P
<0.05
或
P
<0.01
）
。
本次研究結果顯示，
與陰性對照組相比，
0.01
g/L
亞硝酸鈉
+1%
，
2%
的去壁靈芝孢子粉組和
0.1
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
的去壁靈芝
孢子粉組子代果蠅數均較多，
0.01
、
0.1
g/L
亞硝酸鈉
+0.2%
的去
壁靈芝孢子粉組子代果蠅畸變率均較高，差異有統計學意義
表
1
亞硝酸鈉對子代果蠅的致畸變效應實驗
劑量
（
g/L
）
0
0.001
0.01
0.05
0.1
數目
（
x±s
，
只
）
345.38
±
32.32
290.98
±
48.43
*
173.27
±
13.67
**
167.78
±
23.32
**
101.11
±
21.23
**
雄
∶
雌
0.92
1.05
1.21
*
0.89
1.40
**
畸變率
(%)
0.58
0.34
1.15
*
2.97
*
5.94
**
（
n
=6
）
注：
與對照
（
0
g/L
）
組比較，
*
P
<0.05
，
**
P
<0.01
。
表
3
去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅
畸變效應的抑製作用實驗
亞硝酸鈉
（
g/L
）
0
0.01
0.1
去壁靈芝孢子粉
（
％
）
0
0.2
1
2
0.2
1
2
數目
（
x±s
，
只
）
345.38
±
32.32
414.44
±
24.32
581.98
±
26.65
**
549.89
±
14.43
**
453.23
±
34.53
*
439.48
±
32.44
400.22
±
21.76
雄
∶
雌
0.92
0.58
0.78
0.92
0.82
0.68
0.86
（
n
=6
）
畸變率
(%)
0.58
2.66
*
1.20
0.91
3.31
**
0.91
0.50
注：
與陰性對照組比較，
*
P
<0.05
，
**
P
<0.01
。
表
2
未去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果
蠅畸變效應的抑製作用實驗
亞硝酸鈉
（
g/L
）
0
0.01
0.1
未去壁靈芝孢子粉
（
％
）
0
0.2
1
2
0.2
1
2
數目
（
x±s
，
只
）
345.38
±
32.32
525.21
±
44.34
**
492.77
±
34.23
*
464.56
±
24.32
*
445.43
±
64.21
439.49
±
33.78
399.88
±
34.62
雄
∶
雌
0.92
0.96
1.09
0.88
1.14
0.82
0.87
（
n
=6
）
畸變率
(%)
0.58
1.90
*
1.21
1.30
2.70
**
0.91
0.50
注：
與陰性對照組比較，
*
P
<0.05
，
**
P
<0.01
。
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·
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2
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卷第
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Health,
July
200
9
,
Vol． 2
6
,
No．
7
（
P
<0.05
或
P
<0.01
）
；且隨著去壁靈芝孢子粉染毒濃度的增加，
子代果蠅畸變率呈下降趨勢
。
與陰性對照組相比，經過未去壁靈芝孢子粉處理的果蠅子
一代數目隨著染毒濃度的增加呈下降趨勢，而經過去壁靈芝孢
子粉處理後的果蠅子一代數目隨著染毒濃度的增加呈上升的趨
勢
。
這提示靈芝孢子粉對果蠅的繁殖有一定的影響，
未去壁靈芝
孢子粉對果蠅的繁殖有一定的抑製作用，而去壁靈芝孢子粉則
可以促進果蠅的繁殖
。
目前，
對靈芝孢子粉的研究主要集中在抗
癌作用
、
免疫作用
、
除自由基作用等方面
[9]
，
而關於其對生殖影響
的報導較少
。
靈芝孢子粉對果蠅生殖的影響可能與靈芝孢子粉
的抗氧化和清除自由基作用有關
[10]
。
由於未去壁靈芝孢子粉的
活性較差，高濃度的未去壁靈芝孢子粉清除超氧陰離子自由基
的能力有所下降
。
本次實驗可以為研究靈芝孢子粉對人類生殖功能的影響提
供參考信息，
但仍需要進一步研究
。
參考文獻：
［
1
］
郭春沅
.
靈芝的藥理研究綜述
〔
J
〕
.
中國食用菌，
1998
，
17(3)
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2
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武變英，
徐月清
.
靈芝浸液對小鼠免疫功能的調節作用
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J
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.
河北大
學學報
自然科學版，
1999
，
19(1)
：
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［
3
］
楊星星，
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收稿日期：
2008
-
08
-
15
修回日期：
2009
-
02
-
20
）
（
本文編輯：
韓威
）
【
監督監測
】
為了解青海省海西州碘缺乏病防治情況，
根據
《
青海省實現
消除碘缺乏病目標實施方案
》
的通知及
《
關於印發青海省碘鹽監
測實施細則
》
要求，
結合海西州鹽業資源豐富的特點，
於
2007
年
對全州
（
格爾木市，
德令哈市，
都蘭縣，
烏蘭縣，
天峻縣
）
碘缺乏病
防治情況進行調查
。
按人口比例概率抽樣方法進行抽樣
。
共採集
1
540
份食鹽樣品
（每戶一份
）
，
採用
GB/T
13025.7
—
1999
《
製鹽
工業通用試驗方法
碘離子的測定
》
的直接滴定法測定鹽碘，
依
據
GB
5461
—
2000
《
食用鹽
》
進行判定
。
採集
385
件家庭主婦尿
樣和
697
件
8~10
歲兒童尿樣
（採集尿樣的前幾天和當日保持
通常飲食，不食用高碘鹽飲食或服用含碘藥物
）
,
採用酸消化砷
鈰接觸法測定尿碘，對尿碘過高和過低的樣本進行複檢
。
按
1996
年國家技術監督局和衛生部頒布的標準對
70
636
名
8~10
歲
兒童進行甲狀腺腫大的觸診並分度
。
採用學生應答與家庭入戶
問卷相結合的方式進行碘缺乏病防治健康教育效果調查
（
主要
內容是碘缺乏的危害及預防措施等
）
。
在每所抽樣學校的五年級
中隨機選取一個班的
20
名學生採用統一試捲進行調查；
同時在
抽樣學校所在的村隨機選取
5
戶家庭，採取統一問卷對家庭主
婦進行調查，
共調查
1
410
名兒童和
564
名家庭主婦，
分別計算
知曉率
。
結
果
顯
示
，
1
540
份
食
鹽
樣
品
中
，
1
350
份
鹽
樣
鹽
碘
含
量
≥
5
mg/kg
，
碘鹽覆蓋率為
87.66%
。
合格碘鹽
1
289
份，
合格碘
鹽食用率為
83.70%,
碘鹽合格率
95.48%
。
鹽碘含量
＜
5
mg/kg
的食
鹽
190
份
,
非碘鹽食用率為
12.33%
。
385
名家庭主婦尿碘中位數
為
150.48
μ
g/L
，
697
名
8~10
歲兒童尿碘中位數為
147.75
μ
g/L
,
尿碘低於
20
μ
g/L
的兒童佔
3.75%
。
70
636
名
8~10
歲兒童中，
甲
狀腺腫大者
777
人
,
腫大率為
1.1%
。
兒童和家庭主婦健康教育知
曉率分別為
90.25%
和
86.1%
。
調查結果顯示海西州居民碘鹽食用率
、
覆蓋率平均值達到
了基本消除碘缺乏病指標，
但是，
地區間還存在一定的差距，
格
爾木和烏蘭合格碘鹽食用率和覆蓋率較低
（格爾木：
72.92
％
，
76.39
％
；
烏蘭：
70.49
％
，
78.82
％
）
，
主要原因是兩地均位於鹽湖附
近，
當地原鹽市場管理困難，
市場受到非碘鹽的衝擊
。
尿碘
、
甲狀
腺腫大率均達到了防治目標，
表明在各級政府的重視下，
各項措
施落實取得了顯著成效，但仍然要充分認識到碘缺乏病防治工
作的重要性
、
艱鉅性
、
反复性和復雜性
。
應進一步加強部門協作，
落實齊抓共管
。
依法加強碘鹽產
、
供
、
銷環節的監督監測和管理
。
問卷調查結果提示需進一步加大宣傳力度，特別是對重點人群
的宣傳要有舉措，
使他們認識到碘缺乏的危害及防治方法，
提高
自我保健意識，
自覺購買
、
科學使用合格碘鹽